Western Blot（WB）實(shí)驗需要購買的試劑和耗材可分為以下幾類，按實(shí)驗步驟（樣品制備、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、抗體孵育、檢測）整理如下：

一、試劑

1. 樣品制備

• 裂解緩沖液：

  • RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑）

  • NP-40或Triton X-100（溫和裂解）

• 蛋白酶/磷酸酶抑制劑：PMSF、Cocktail抑制劑

• 蛋白定量試劑：

  • BCA法（BCA試劑盒）

  • Bradford法（考馬斯亮藍(lán)試劑）

• 上樣緩沖液：

  • Laemmli Buffer（含SDS、β-巰基乙醇或DTT）

• 還原劑：DTT（二硫蘇糖醇）或β-巰基乙醇

2. 電泳（SDS-PAGE）

• 凝膠制備試劑：

  • 30%丙烯酰胺/雙丙烯酰胺（Acr/Bis）

  • SDS（十二烷基硫酸鈉）

  • TEMED（四甲基乙二胺）

  • 過硫酸銨（APS）

• 電泳緩沖液：Tris-Glycine-SDS緩沖液

3. 轉(zhuǎn)膜（濕轉(zhuǎn)/半干轉(zhuǎn)）

• 轉(zhuǎn)膜緩沖液：

  • Tris-Glycine緩沖液（濕轉(zhuǎn)）

  • Tris-Glycine-SDS緩沖液（半干轉(zhuǎn)需加甲醇）

• 甲醇（PVDF膜活化用）

4. 封閉與抗體孵育

• 封閉劑：

  • 5%脫脂牛奶（TBST或PBS配制）

  • BSA（牛血清白蛋白，適用于磷酸化蛋白）

• 洗滌緩沖液：TBST（Tris-HCl + Tween-20）或PBST

• 一抗：目標(biāo)蛋白特異性抗體（如Anti-β-actin、Anti-GAPDH等內(nèi)參抗體）

• 二抗：

  • HRP（辣根過氧化物酶）或熒光標(biāo)記的二抗（如Goat Anti-Rabbit IgG-HRP）

5. 檢測

• 化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑：

  • 超敏ECL底物（如Pierce™ ECL Plus）

• 熒光檢測試劑（若使用熒光二抗）：

  • 近紅外熒光染料（如IRDye）

二、耗材

1. 樣品處理

• EP管（1.5 mL、0.5 mL）

• 離心管（15 mL、50 mL）

• 細(xì)胞刮刀或勻漿器（組織樣品）

2. 電泳

• 電泳槽（垂直電泳系統(tǒng)）

• 玻璃板/墊片（制膠用）

• 梳子（10/12/15齒，用于制膠加樣孔）

• 上樣槍頭（細(xì)長Tip，避免樣品溢出）

3. 轉(zhuǎn)膜

• 轉(zhuǎn)膜夾/三明治結(jié)構(gòu)（濾紙+凝膠+膜）

• 濾紙（厚濾紙，尺寸匹配凝膠）

• 膜：

  • PVDF膜（需甲醇活化）

  • 硝酸纖維素膜（NC膜，無需活化）

• 轉(zhuǎn)膜裝置（濕轉(zhuǎn)槽或半干轉(zhuǎn)儀）

4. 抗體孵育與檢測

• 搖床（抗體孵育時使用）

• 顯影盒/暗盒（化學(xué)發(fā)光成像）

• X光片（傳統(tǒng)檢測）或化學(xué)發(fā)光成像儀（數(shù)字成像）

5. 其他耗材

• 冰盒（樣品低溫操作）

• 制膠架/灌膠器

• 鑷子（取膜用，避免手直接接觸）

• 計時器/磁力攪拌器

三、可選試劑/耗材（根據(jù)實(shí)驗需求）

• 預(yù)染蛋白Marker（觀察電泳進(jìn)程）

• 脫色搖床（考馬斯亮藍(lán)染色后脫色）

• Strip緩沖液（抗體剝離后重復(fù)孵育）

• 無塵紙（擦拭膜表面）

注意事項

1. 抗體選擇：一抗需驗證特異性（推薦引用文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫如CiteAb）；二抗需匹配一抗種屬（如兔源一抗搭配抗兔二抗）。

2. 膜的選擇：

   • PVDF膜：結(jié)合能力強(qiáng)，適合低豐度蛋白，需甲醇活化。

   • NC膜：親水性好，但易碎，適合高豐度蛋白。

3. ECL試劑：超敏底物可檢測低表達(dá)蛋白，但信號持續(xù)時間短，需及時成像。

建議根據(jù)實(shí)驗具體目標(biāo)（如磷酸化蛋白檢測需高純度BSA封閉）調(diào)整試劑清單。

“如果你還有任何關(guān)于試劑耗材需求的問題，歡迎聯(lián)系集思儀器，免費(fèi)咨詢熱線：400-0027-510 ”）